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如何制備蛋白質(zhì)電泳凝膠?

 更新時(shí)間:2023-10-12    點(diǎn)擊量:764

你知道該如何制備蛋白質(zhì)電泳凝膠嗎?讓我們一起來看看吧!

一、制備方法

1. 根據(jù)垂直電泳槽說明書安裝玻璃板,確定需配制分離膠的濃度和體積,配制所需分離膠;

2. 迅速將分離膠注入兩玻璃板間隙中,留出灌注積層膠所需空間(梳子的齒長(zhǎng)再加1cm,用滴管小心地在分離膠上覆蓋一層0.1% SDS(當(dāng)丙烯酰胺濃度≤8%時(shí))或異丁醇或水(當(dāng)丙烯酰胺濃度≥10%時(shí)),覆蓋層可防止氧擴(kuò)散進(jìn)入凝膠而抑制聚合反應(yīng)。將凝膠垂直置于室溫下;

3. 分離膠聚合wan全后,倒出覆蓋層液體,用去離子水洗滌凝膠頂部數(shù)次以除去未聚合的丙烯酰胺,盡可能排除凝膠上的液體;

4. 確定需配制濃縮膠的體積,配制所需濃縮膠,然后直接將濃縮膠灌注在分離膠上,立即插入干凈的配套梳子,避免氣泡,然后加入濃縮膠溶液以充滿梳子之間的空隙。待濃縮膠聚合后,拔出梳子,形成加樣孔;

5. 用去離子水將電泳緩沖液貯存液稀釋5倍,倒入電泳槽,將加樣孔充滿,這時(shí)加樣孔中的氣泡可通過電泳緩沖液排除。

二、常見問題

1. 濃縮效應(yīng):樣品在開始電泳時(shí),通過濃縮膠濃縮成高濃度的樣品薄層;

2. 電荷效應(yīng):在均一電勢(shì)梯度和PH的分離膠中,由于各蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)不同所帶電荷量不同,在電場(chǎng)中所受到的引力不同,經(jīng)過一段時(shí)間的電泳,各種蛋白質(zhì)就以一定順序排列成一條條蛋白質(zhì)區(qū)帶;

3. 有分離膠孔徑較小,分子量大小和分子形狀不同的蛋白質(zhì)通過分離膠后,所受的阻滯程度不同,因而遷移率不同而被分離。

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