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常見(jiàn)的DNA純化方法

 更新時(shí)間:2023-10-10    點(diǎn)擊量:3500
 在分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中,提純DNA樣本是十分常見(jiàn)的步驟,下面給大家介紹幾種常見(jiàn)的DNA純化方法,一起來(lái)看看吧!

一、苯酚-氯仿抽提法

苯酚和氯仿是常見(jiàn)的有機(jī)溶劑,一般可以用來(lái)將蛋白雜質(zhì)從DNA樣本里去除。基本原理是,有機(jī)溶劑會(huì)使雜質(zhì)蛋白變性,并將雜質(zhì)蛋白留在有機(jī)溶劑層,而DNA分子是有水溶性的,所以會(huì)進(jìn)入水溶液層。這樣DNA和雜質(zhì)蛋白就被分開(kāi)了。這個(gè)方法的好處是便宜有效,特別是在提取基因組DNA時(shí),要去掉許多從細(xì)胞裂解液中帶來(lái)的蛋白,苯酚法十分好用但苯酚和氯仿是有毒溶劑,而且有可能會(huì)殘留在提純過(guò)后的DNA樣本中,對(duì)后續(xù)反應(yīng)造成影響。

二、乙醇沉降法

乙醇沉降法其實(shí)就是一種鹽析方法。鹽陽(yáng)離子(一般是Na+、醋酸鈉鹽)和70%的乙醇加入到DNA樣本中后,陽(yáng)離子與帶負(fù)電的DNA骨架相互作用,從水分子那里將DNA搶奪出來(lái),而乙醇改變了DNA的結(jié)構(gòu),使得DNA聚合最終沉降。

三、磁珠吸附法

原理是在攜帶正電的磁珠和DNA分子特定結(jié)合后,磁珠被固定在磁極上,DNA樣本中的其他雜質(zhì)在此時(shí)被移除,而后使用高pH的洗出液使得磁珠帶負(fù)電,因此DNA分子又會(huì)脫離磁珠,被洗出。

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