Zymo 質(zhì)粒中提/大提試劑盒是用于提取質(zhì)粒DNA或大分子DNA的試劑盒。下面是對(duì)其原理的詳細(xì)介紹。
 

　　1.細(xì)胞裂解：在質(zhì)粒DNA提取過(guò)程中，首先需要將目標(biāo)細(xì)胞進(jìn)行裂解來(lái)釋放細(xì)胞內(nèi)的DNA。通常，使用裂解緩沖液和蛋白酶來(lái)破壞細(xì)胞膜和核膜，使DNA從細(xì)胞內(nèi)釋放出來(lái)。
 

　　2.去除核酸：裂解后，樣品中存在各種各樣的核酸，包括基因組DNA、RNA和RNA-DNA雜交物。Zymo質(zhì)粒提取試劑盒使用一種專(zhuān)有的高鹽緩沖液，使質(zhì)粒DNA高親和性地結(jié)合到特殊的離心柱或微珠上，而其他核酸則被保留在上清液中。這種選擇性結(jié)合是通過(guò)離心柱或微珠上的化學(xué)結(jié)構(gòu)來(lái)實(shí)現(xiàn)的，這些化學(xué)結(jié)構(gòu)能夠與質(zhì)粒DNA特異性地結(jié)合。
 

　　3.洗滌：為了去除離心柱或微珠上的雜質(zhì)和剩余的其他核酸，在異高鹽條件下，使用洗滌緩沖液洗滌離心柱或微珠。這一步驟可以去除可能存在的蛋白質(zhì)、RNA和其他非目標(biāo)DNA物質(zhì)。
 

　　4.DNA解吸：經(jīng)過(guò)洗滌后，目標(biāo)質(zhì)粒DNA依然附著在離心柱或微珠上，需要用低鹽緩沖液來(lái)解離DNA。低鹽緩沖液的作用是改變DNA與離心柱或微珠之間的相互作用，使DNA釋放到提取管中。
 

　　5.純化：解吸后的DNA可能會(huì)含有一些雜質(zhì)，如蛋白質(zhì)和其他小分子。為了獲得更純凈的DNA，可使用乙醇沉淀法或其他技術(shù)進(jìn)行后續(xù)純化。這一步驟可以去除與DNA結(jié)合的雜質(zhì)，并得到高質(zhì)量的質(zhì)粒DNA。
 

　　Zymo 質(zhì)粒中提/大提試劑盒的應(yīng)用：
 

　　1.質(zhì)粒構(gòu)建：可以用于從大量細(xì)菌中高效提取質(zhì)粒DNA，用于質(zhì)粒構(gòu)建，如基因克隆等實(shí)驗(yàn)。
 

　　2.表達(dá)載體構(gòu)建：提取的質(zhì)粒DNA可以用于構(gòu)建表達(dá)載體，用于蛋白質(zhì)的高效表達(dá)和純化。
 

　　3.序列分析：質(zhì)粒DNA可以用于進(jìn)行序列分析，包括測(cè)序和同源性比對(duì)等實(shí)驗(yàn)。