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022-66387942一、什么是同型對照抗體?
同型對照抗體是一種與檢測抗體(一抗)相同種屬、相同種型(和亞類)、具有相同標記物的但對目標抗原無特異性識別能力的一抗。
檢測抗體和同型對照抗體唯1的區(qū)別在于對待測樣本中目標抗原的特異性識別能力。檢測抗體能在代測樣本中特異性識別并結(jié)合目標抗原,而同型對照抗體不會特異性結(jié)合任何存在待測樣本中的抗原,其他屬性二者是完權(quán)一致的。
二、為什么需要同型對照抗體?
在流式細胞術(shù)(FC)和免疫組織化學(IHC)等實驗中,有很高的背景染色風險,我們會發(fā)現(xiàn)抗體與細胞的結(jié)合,可以通過不止抗體-抗原特異性結(jié)合這一種方式。
比如 B細胞、巨噬細胞、單核細胞和樹突狀細胞等細胞表面會表達Fc受體,它能夠非特異性結(jié)合抗體Fc端,將抗體標記在非目標細胞上;還有一些脂質(zhì)和碳水化合物等,他們也可以通過非特異的方式與抗體結(jié)合。這些非特異性結(jié)合對于我們的實驗而言,就是一種干擾信號,造成實驗結(jié)果的不準確甚至錯誤。
因此,為了評估非特異性背景信號對染色結(jié)果的貢獻并區(qū)分非特異性和特異性抗體染色,同型對照是非常有必要的。
三、如何選擇和使用同型對照抗體?
在選擇上,同型對照抗體必須與所使用的檢測抗體(一抗)的相匹配,須來源于相同物種,具有相同種型和Ig亞類,并具有相同標記物。比如,如果你使用PE標記的兔重組單克隆抗體,那你應該使用PE偶聯(lián)的兔IgG同型對照抗體作為對照。
在使用上,同型對照組用同型對照抗體代替一抗,其他實驗條件與實驗組均相同,包括:工作濃度(μg/ml)、溫度、孵育和檢測方法。
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