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022-66387942產(chǎn)品名稱:NEB rCutSmart緩沖液(B6004V)現(xiàn)貨供應
產(chǎn)品貨號:B6004V
產(chǎn)品品牌:NEB
產(chǎn)品簡介:
NEB rCutSmart緩沖液(B6004V)適用于各類限制性內(nèi)切酶,超過 210 種限制性內(nèi)切酶都能在rCutSmart緩沖液中表現(xiàn)出百分之bai的活性,從而極大地簡化了實驗過程中雙酶切反應的準備工作。rCutSmart 緩沖液中富含重組白蛋白,因此可減少試管數(shù)量和移液操作步驟。此外,許多DNA修飾酶也能在rCutSmart緩沖液中保持100% 活性,因此無需進行后續(xù)純化。
此外,New England Biolabs為每種限制性內(nèi)切酶提供了一種采用顏色標記的10X NEBuffer 反應緩沖液,以確保酶保持最佳(100%)活性。New England Biolabs的大多數(shù)酶均配有四種標準NEBuffer 緩沖液之一。這些緩沖液中含有重組白蛋白。
使用方法:
同時用兩種限制性核酸內(nèi)切酶消化 DNA 底物(雙重消化)是一種常見的省時程序。選擇最hao的NEBuffer以提供優(yōu)化酶活性的反應條件,并避免與某些酶相關(guān)的星形活性是一個重要的考慮因素。每種酶都配有最佳的 NEBuffer,以確保 100% 的活性。NEBuffer 組合物列在緩沖區(qū)頁面上。
設(shè)置雙消化
· 可以在 rCutSmart 緩沖液™中設(shè)置含有 NEB 限制性內(nèi)切酶的雙重酶解。否則,請選擇對兩種酶都具有最大活性的 NEBuffer。如果對星體活性有顧慮,請考慮使用我們的高保真 (HF®) 酶之一。
· 根據(jù)推薦方案設(shè)置反應。任何反應中甘油的最終濃度應小于5%,以盡量減少星活性的可能性。例如,在50μl反應中,加入的酶的總量不應超過5μl。 NEBcloner也可用于確定推薦的雙消化條件。
· 如果需要兩種不同的孵育溫度,請選擇最佳反應緩沖液并相應地設(shè)置反應。加入第一種酶并在所需溫度下孵育。然后,加熱滅活第一種酶,加入第二種酶并在推薦溫度下孵育。
· 根據(jù)酶在非最佳NEBuffer中的活性等級,可以調(diào)整單位數(shù)或孵育時間,以補償較慢的裂解速率。限制性內(nèi)切酶性能圖表可指示星形活性是否是次優(yōu)緩沖液的問題。
設(shè)置順序消化
· 如果沒有兩種酶表現(xiàn)出>50%活性的緩沖液,則可以進行順序消化。
· 使用推薦緩沖液中鹽濃度zui低的限制性核酸內(nèi)切酶設(shè)置反應并孵育完成。
· 調(diào)整反應的鹽濃度(使用少量濃鹽溶液)以近似第二限制性核酸內(nèi)切酶的反應條件。
· 加入第二種酶并孵育以完成第二反應。
· 或者,可以使用離心柱在第二次反應之前分離DNA。
產(chǎn)品選購:
貨號 | 產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 |
B6004V | rCutSmart緩沖液 | 2.5 ml |
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