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022-66387942細(xì)胞培養(yǎng)物污染往往是細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室中最常見(jiàn)的問(wèn)題,有時(shí)會(huì)造成非常嚴(yán)重的后果。細(xì)胞培養(yǎng)污染物可分為兩大類(lèi),一類(lèi)是化學(xué)污染物,如培養(yǎng)基、血清和水中的雜質(zhì),包括內(nèi)毒素、增塑劑和洗滌劑,另一類(lèi)是生物污染物,如細(xì)菌、霉菌、酵母、病毒和支原體,以及其他細(xì)胞系的交叉污染。那么我們?cè)?/span>如何分辨各種細(xì)胞污染呢?讓我們一起來(lái)看看吧!
一、細(xì)菌污染
肉眼觀察特點(diǎn):細(xì)菌污染時(shí)細(xì)胞培養(yǎng)基可能在幾個(gè)小時(shí)呈現(xiàn)混濁,爆發(fā)很快。有時(shí)稍加震蕩,便會(huì)有很多混濁物漂起。
在低倍顯微鏡下,細(xì)菌以細(xì)小顆粒的形式出現(xiàn)在細(xì)胞之間,在高倍顯微鏡下觀察可以分辨出單個(gè)細(xì)菌的形狀。
二、真菌污染
常見(jiàn)的真菌有煙曲霉、黑曲菌、白色念珠菌和酵母菌。真菌污染時(shí)細(xì)胞培養(yǎng)液一般不會(huì)變渾濁,但在顯微鏡下可以觀察到各種形狀的菌絲。像念珠菌和酵母菌則會(huì)呈卵圓形散在細(xì)胞周邊和細(xì)胞之間。
肉眼觀察特點(diǎn):真菌污染最短3天才能長(zhǎng)出橢圓形的霉斑。霉斑往往會(huì)漂浮在培養(yǎng)液表面,隨著時(shí)間逐步擴(kuò)大。真菌污染后,細(xì)胞生長(zhǎng)變慢,最后由于營(yíng)養(yǎng)耗盡及毒性作用而使細(xì)胞脫落死亡。真菌生長(zhǎng)的比較慢,不那么容易被發(fā)現(xiàn),但是一旦發(fā)現(xiàn)有它的存在細(xì)胞就被污染了,也很難救活了。
三、病毒污染
組織細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中,如果沒(méi)有除去潛在的病毒,就會(huì)產(chǎn)生病毒污染。目前,從原代猴腎細(xì)胞的培養(yǎng)中已發(fā)現(xiàn)不少于20種血清性病毒。
盡管病毒污染的細(xì)胞不影響原代培養(yǎng),但生產(chǎn)疫苗是不安全的。因此,潛在病毒是細(xì)胞大量生產(chǎn)和疫苗、干擾素等生物制品制作中的難題。
五、交叉污染
雖然不如微生物污染普遍,但許多細(xì)胞系與HeLa以及其他快速生長(zhǎng)細(xì)胞系之間的廣泛交叉污染已經(jīng)是一個(gè)明確的問(wèn)題,會(huì)產(chǎn)生嚴(yán)重的后果。
在進(jìn)行多種細(xì)胞培養(yǎng)操作時(shí),所用器具要嚴(yán)格區(qū)分。
在進(jìn)行換液或傳代操作時(shí),注射器和滴管不要觸及細(xì)胞培養(yǎng)瓶瓶口,以免把細(xì)胞帶到培養(yǎng)液中污染其他細(xì)胞。
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