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如何選擇免疫組化中的一抗?

 更新時(shí)間:2023-10-20    點(diǎn)擊量:600

免疫組化實(shí)驗(yàn)看似容易,但真想把結(jié)果做漂亮,還是需要花上很長(zhǎng)一段時(shí)間去積累和摸索經(jīng)驗(yàn)。一味按照網(wǎng)上操作流程來(lái)做,結(jié)果往往并不理想,最終結(jié)果未能達(dá)到預(yù)期的效果。那么如何選擇免疫組化實(shí)驗(yàn)中的一抗呢?讓我們一起來(lái)看看吧!

一、單克隆和多克隆抗體的選擇

存在于抗原表面的,決定抗原特異性的特殊化學(xué)基團(tuán)稱為抗原決定簇,又稱抗原表位。一個(gè)抗原可以有一種或多種不同的抗原表位,每種表位只有一種抗原特異性。

用一種包含多種抗原決定簇的抗原免疫動(dòng)物,可刺激機(jī)體多個(gè) B 細(xì)胞克隆產(chǎn)生針對(duì)多種抗原表位的抗體,就是多克隆抗體(polyclonal antibody, pAb)。由單一 B 細(xì)胞克隆產(chǎn)生的識(shí)別一種抗原表位的抗體,稱為單克隆抗體(monoclonal antibodies, mAb)。

在抗原抗體反應(yīng)中,一般單克隆抗體特異性強(qiáng),切片和細(xì)胞染色產(chǎn)生的背景信號(hào)更少,但親和力相對(duì)小,檢測(cè)抗原靈敏度相對(duì)就低;而多克隆抗體特異性稍弱,但抗體的親和力強(qiáng),因?yàn)椴灰蕾噯我槐砦?,因此其?duì)微小抗原變化(例如多態(tài)性、糖基化異質(zhì)性或者輕微變性)的包容性更強(qiáng),靈敏度高,但易出現(xiàn)非特異性染色(可以通過(guò)封閉等避免)。

二、應(yīng)用范圍的選擇

有的一抗只能用于 WB ( Western blotting)或免疫組化、免疫熒光、免疫沉淀等,必須選擇能做免疫組化的抗體。

三、適用種屬的選擇

這一點(diǎn)很重要,你的目的是檢測(cè)哪個(gè)種屬樣本,就必須選擇能檢測(cè)該種屬的抗體,因?yàn)榭贵w在不同種屬間存在差異。

四、宿主來(lái)源

宿主來(lái)源,一般兔來(lái)源的多是多克隆,也有兔單克隆;而小鼠來(lái)源的多是單克隆。需要根據(jù)一抗宿主來(lái)源來(lái)選擇相應(yīng)的二抗。

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