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DEAE SepFast 6HF Plus是弱陰離子交換介質(zhì)。結(jié)合容量和結(jié)合動(dòng)力學(xué)高于IEX SepFast 6HF系列。該離子交換層析介質(zhì)特別適用于需要增加結(jié)合能力的生物分子的一般大規(guī)模純化。
DEAE SepFast 6HF Plus在配體密度、負(fù)載量和單個(gè)組分的分離能力之間進(jìn)行了平衡設(shè)計(jì),適用于大規(guī)模生物制造應(yīng)用。
DEAE SepFast 6HF Plus的基質(zhì)由高度交聯(lián)的 6%瓊脂糖和葡聚糖制成,具有優(yōu)異的流動(dòng)性。它對(duì)生物加工行業(yè)中遇到的大多數(shù)化學(xué)條件都非常穩(wěn)定。
2.產(chǎn)品特性
表1 DEAE SepFast 6HF Plus的特性
DEAE SepFast 6HF Plus | |
基質(zhì) | 高度交聯(lián)的6%瓊脂糖接枝葡聚糖 |
功能配體 | 二乙氨基乙基弱陰離子 |
總離子容量 | 0.08-0.13 mmol/ml |
動(dòng)態(tài)結(jié)合容量* | >130 mg BSA/ml |
粒徑 | 50 - 150 µm |
壓力-流速特性** | >500 cm/hr at 3 bar |
操作壓力 | Up to 3 bar |
pH穩(wěn)定性 | 2-14 (短期),3-12 (長(zhǎng)期) |
工作溫度 | 4℃-30℃ |
化學(xué)穩(wěn)定性 | 所有常用的緩沖液;1 M乙酸、1 M NaOH、6 M鹽酸胍、8 M 尿素、30% 異丙醇、70% 乙醇 |
注意事項(xiàng) | 避免氧化劑和陰離子洗滌劑 |
保存 | 20%乙醇 |
*測(cè)試條件:10 mM緩沖液 pH 7.5,上樣5 mg/ml 蛋白質(zhì),停留時(shí)間5分鐘,50%穿透。
**在 32 mm內(nèi)徑色譜柱中,床高 15 cm,室溫下用水測(cè)量。
圖1 IEX SepFast Media的壓力-流動(dòng)特性
(備注:將基礎(chǔ)基質(zhì)填充到32 mm內(nèi)徑的柱子中,最終床?為15 cm。流動(dòng)相是去離子水。測(cè)試在室溫下進(jìn)行)
圖2 滴定曲線(xiàn)
3.方法優(yōu)化
建議在載量、流速、結(jié)合pH值、結(jié)合離子強(qiáng)度、洗脫速度和梯度等參數(shù)之間進(jìn)行篩選。由于DEAE SepFast 6HF Plus的快速孔隙可及性,結(jié)合步驟可以在比洗脫步驟更快的流速下完成。建議特別注意優(yōu)化洗脫條件以獲得最佳分離能力。
強(qiáng)離子交換介質(zhì)可以在較寬的pH范圍內(nèi)保持其電荷(并因此保持其功能),而弱離子交換介質(zhì)的離解程度和離子交換容量隨pH值而變化。因此,如果使用弱離子交換介質(zhì),優(yōu)化pH值更為關(guān)鍵。
通常,在優(yōu)化方法時(shí),平衡組分分離度與工藝產(chǎn)量是主要考慮因素。此外,對(duì)于不穩(wěn)定或對(duì)剪切力敏感分子的純化,需要優(yōu)化操作條件以平衡產(chǎn)量和對(duì)目標(biāo)分子可能造成的損害。
4.裝柱
DEAE SepFast 6HF Plus由高度交聯(lián)的珠狀瓊脂糖制成,具有出色的機(jī)械強(qiáng)度。該介質(zhì)可以很容易地以任何可能的填充方式填充到任何類(lèi)型的色譜柱中。典型的包裝壓力高達(dá)3 bar。
5.保養(yǎng)
根據(jù)不同的應(yīng)用,介質(zhì)可能會(huì)被多次使用。如需重復(fù)使用,請(qǐng)參閱以下說(shuō)明。
(1)再生
每次運(yùn)行后,用高離子強(qiáng)度溶液(例如1M NaCl緩沖液)或增加pH 值。
(2)就地清洗 (CIP)
CIP是一種去除強(qiáng)結(jié)合物質(zhì)的程序,例如再生后殘留在吸附劑表面的脂質(zhì)、內(nèi)毒素和變性蛋白質(zhì)。定期 CIP 可防止污染物在填充床中積聚,并有助于保持色譜柱性能。
應(yīng)根據(jù)存在的污染物類(lèi)型為每個(gè)過(guò)程制定具體的 CIP程序。CIP 的頻率取決于各個(gè)應(yīng)用的性質(zhì)。
以下信息可作為一般指導(dǎo):濃度高達(dá)2 M的鹽可用于清除因離子相互作用而結(jié)合的雜質(zhì)。疏水性結(jié)合的污染物可以通過(guò)以下試劑去除:1 M NaOH、低比例的非離子洗滌劑(例如0.1-2%)、堿性或酸性條件下的30% 異丙醇(例如在乙酸或磷酸存在下)。也可以探索上述試劑的組合。一般來(lái)說(shuō),孵育時(shí)間應(yīng)該更長(zhǎng)(例如從 30 min到2 h),以確保污染物WAN全解離。
(3)消毒
建議使用接觸時(shí)間為1 h的0.5?1.0 M NaOH進(jìn)行消毒。
6.儲(chǔ)存
DEAE SepFast 6HF Plus應(yīng)儲(chǔ)存在20%乙醇中(強(qiáng)陽(yáng)離子交換介質(zhì)含有0.2 M NaAC)以防止微生物生長(zhǎng)。將介質(zhì)存儲(chǔ)在4℃到30℃的溫度下。使用前,用至少5床體積的運(yùn)行緩沖液來(lái)平衡介質(zhì)。
7.更多信息
了解更多關(guān)于BioToolomics產(chǎn)品代理信息請(qǐng)聯(lián)系天津益元利康科技有限公司了解產(chǎn)品信息。
8.訂購(gòu)信息
產(chǎn)品 | 規(guī)格 | 貨號(hào) |
DEAE SepFast 6HF | 25 ml | 452101-25ML |
100 ml | 452101-100ML | |
500 ml | 452101-500ML | |
1 litre | 452101-1L | |
5 litre | 452101-5L | |
10 litre | 452101-10L | |
DEAE SepFast 6HF Plus | 25 ml | 453101-25ML |
100 ml | 453101-100ML | |
500 ml | 453101-500ML | |
1 litre | 453101-1L | |
5 litre | 453101-5L | |
10 litre | 453101-10L | |
DEAE SepFast Large Bead | 25 ml | 440301-25ML |
100 ml | 440301-100ML | |
500 ml | 440301-500ML | |
1 litre | 440301-1L | |
5 litre | 440301-5L | |
10 litre | 440301-10L | |
DEAE SepFast Large Bead Plus | 25 ml | 440401-25ML |
100 ml | 440401-100ML | |
500 ml | 440401-500ML | |
1 litre | 440401-1L | |
5 litre | 440401-5L | |
10 litre | 440401-10L | |
DEAE SepFast Large Bead Plus | 25 ml | 440401-25ML |
100 ml | 440401-100ML | |
500 ml | 440401-500ML | |
1 litre | 440401-1L | |
5 litre | 440401-5L | |
10 litre | 440401-10L | |
DEAE SepFast HighRes Plus | 25 ml | 470601-25ML |
100 ml | 470601-100ML | |
500 ml | 470601-500ML | |
1 L | 470601-1L | |
5 L | 470601-5L | |
10 L | 470601-10L |